Description
Introducción del producto:
La lisis IP búfer es una de limulus que lyses células o tejidos en virtud de no desnaturalizar ciertas condiciones, que puede retener la interacción entre la proteína y proteína o de proteínas y ácidos nucleicos en la celda. Las muestras lysed lisado en este especial se utilizan principalmente en los experimentos como immunoprecipitation IP(ImmunolPrecipitation),co-immunoprecipitation(co-IP), ChIP (ChromatinImmunopre-precipitación). Los principales componentes son Tris-Hcl, NaCl, EDTA Na2, NP-40, y el sodio deoxycholate.
El contenido del paquete: | Producto No. | El nombre del producto | La especificación |
| G2038 | El búfer de lisis IP | 100 mL. |
Las condiciones de almacenamiento:
La tienda de 4ºC, válido durante 12 meses.
Instrucciones:
Para muestras de tejido:
1. Las piezas de tejido se lavan con PBS fría para quitar las manchas de sangre. Cortar en trozos pequeños y colocarlos en un homogeneizador.
2. Añadir 10 veces el volumen del tejido este reactivo (agregar inhibidor de proteasa en pocos minutos antes de usar) y homogeneizar cuidadosamente con una amoladora de tejido de alta velocidad.
3. Transferir el homogeneizado en un tubo de centrífuga de 1,5 mL y agitar. En el baño de hielo durante 30 minutos, verter varias veces para garantizar la completa la lisis celular.
- Centrifugar a12000g durante 5 minutos, y recoger el sobrenadante, que es la solución de proteína total.
Para el cultivo de muestras celulares:
1. Para células adherentes:
A. Lave las celdas de 2 a 3 veces con PBS. Completamente absorben el líquido que queda una última vez.
B. Añadir un volumen adecuado de este reactivo (agregar inhibidor de proteasa en pocos minutos antes de usar) en la placa de cultivo y la botella durante 3-5 min. durante este período, la placa de cultivo y la botella estaba sacudido varias veces para hacer los reactivos totalmente en contacto con las células.
C. raspa las células y los reactivos con un rascador de células y recogerlos en un 1,5 mL de tubo de centrífuga.
2. Para la suspensión de celdas:
Recoger las celdas por centrifugación, añadir unos 250 uL de este reactivo (agregar inhibidor de proteasa en pocos minutos antes de usar) por 6 pocillos de células de la placa y agitar.
Baño de hielo durante 30 minutos, tiempo durante el cual, con una pipeta 200uL pipeta varias veces cada 10 minutos para asegurarse de que las células son completamente lysed.
3.centrifugar a 12000g durante 5 minutos, y recoger el sobrenadante, que es el total de proteínas.
Precauciones:
Para muestras de tejido:
Aproximadamente 1 mL de este reactivo es añadido a lisar cada 50mg El tejido. Para los tejidos como el cartílago y piel, la dosificación de los reactivos pueden ser adecuadamente reduce al aumentar la concentración de proteínas.
Para el cultivo de muestras celulares:
1. En condiciones normales de densidad celular, agregue unos 250uL de limulus a cada celda de la placa bien 6.
2. Puede parecer más gruesas, durante el agrietamiento. Puede ser pipetted varias veces hasta que esté líquido. Si ha sido más grueso, puede utilizar un vórtice de sacudir o agregar una cantidad apropiada de limulus. 3.Este reactivo es perjudicial para el cuerpo humano, por favor, proteger adecuadamente.
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